手术室悬浮微生物的检测

E.8.1  悬浮微生物的采样装置有以下两类:

        1 采用无源采样装置，如培养皿。

        2 采用有源采样装置，如撞击采样器、离心采样器、过滤采样器。

E.8.2  空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前，应对各类表面进行擦拭消毒，但不得对室内空气进行蒸熏、喷洒之类的消毒。动态检测均不得对表面和空气进行消毒。

E.8.3  沉降菌检测应符合下列要求：

        1 使用直径90mm (Φ90)的培养皿采样。当采用其他直径培养皿时，应使其总面积和Φ90皿总面积相当。

        2 培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基，必须留样作阴性对照。

        3 培养皿表面应经适当消毒清洁处理后，布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点。在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方。

        4 当用户没有特定要求时，培养皿应布置在地面及其以上0. 8m之内的任意高度。

        5 每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿。

        6 动态监测时也可协商布点位置和高度。

        7 培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数，如工艺无特殊要求应大于等于表E.8.3中的最少培养皿数，另外各加1个对照皿。

        8 当延长沉降时间时，可按比例减少最少培养皿数，为防止脱水，最长沉降时间不宜超过1h，当所需沉降时间超过1h, 可重叠多皿连续采样。除非经过验证，证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数。

        9 培养皿应从内向外布置，从外向内收皿。

        10 每布置完1个皿，皿盖只允许斜放在皿边上，对照皿盖挪开即盖上。

        11 布皿前和收皿后，均应用双层包装保护培养皿，以防污染。

        12 收皿后皿应倒置摆放，并应及时放入培养箱培养，在培养箱外时间不宜超过2h。如无专业标准规定，对于检测细菌总数，培养温度采用（35〜37）℃，培养时间为（24〜48） h；对 于检测真菌，培养温度（27〜29）℃，培养时间3d。

        13 布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服，但不得穿大褂。 头、手均不得裸露，裤管应塞在袜套内，并不得穿拖鞋。

        14 对培养后的皿上菌落计数时，应釆用5〜10倍放大镜查 看，若有2个或更多的菌落重叠，可分辨时则以2个或多个菌落计数。

        15 当单皿菌落数太大受到质疑时，可按以下原则之一进行处理：

     1）作为坏点剔除；

     2）重测，如结果仍大，以两次平均值为准；如结果很小，可再重测；

     3）重测该处微粒浓度，参考此结果作出判断。

     所有上述处理方法均应记录在案。

        16 每皿平均菌落数取到小数点后1位。

        17 动态监测时每点叠放多个平皿或釆用可自动切换的仪器，每点应采满4h以上，每皿可采30min。当只放1个皿时, 可少于4h，但不可少于1h。

E.8.4  浮游菌采样应符合下列要求:

        1 使用单级或多级撞击式采样器、离心采样器或过滤釆样器，采样必须按所用仪器说明书的步骤进行，特别要注意检测之前对仪器消毒灭菌，并对培养皿或培养基条做阴性对照。

        2 釆样点数应不少于微粒计数浓度测点数。

        3 釆样点应在离地0.8m高平面上均匀布置，或经委托方 （用户）与检测方协商确定。乱流洁净室内不得在送风口正下方布点。静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒。

        4 每点采样1次，如工艺无特殊要求，每次采样量应大于等于表E.8.4推荐的浮游菌最小采样量。

        每次釆样时间不宜超过15min，不应超过30min。当洁净度很高，或预期含菌浓度可能很低时，釆样量应大于最小采样量很多，以满足减少计数误差的要求。

        5 采样器应用支架固定，采样时检测人员应退出，手持离心式釆样器除外。检测人员的穿戴同本附录E. 8. 3条第15款。 必须手持采样器时，应将手臂伸直，站于下风向。

        6  采样后宜在2h之内将釆样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养。

        7 每点平均值取到小数点后1位。

        8 动态监测的测点位置、数量和高度由工艺并经协商确定。 每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量，不分级别, 均应大于1m。每点可用多台采样器。

        9 单点菌落数太大时应按附录E. 8. 3条第15款的原则处理。

E.8.5  表面染菌密度检测应符合下列要求：

        1 对于洁净室内围护结构、设备等表面的微生物采样，应采用无菌棉拭子擦抹法，当表面很大，硬且平时，也可采用接触皿法。

        2 用规格板标定出面积为25cm²的区块，对于围护结构，每面结构不少于4块，对于设备，每件不少于2块，取样地点均协商确定。

        3 将无菌棉拭于含1.0mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后，对一区块擦抹采样，横竖往返8次。每一区块使用1根无菌棉拭。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中，经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次。

        4 取含菌液体1.0ml，以琼脂灌注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，于（35〜37）℃培养箱中培养（24〜48） h后计数。

        5 必须将本次检测所用的稀释液、棉拭子、培养基等留样作阴性比照。

        6 具体事项遵照卫生部《消毒技术规范》执行。

        7 对于适用接触皿采样的表面，以无菌操作方式，先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿，使培养基表面高出培养皿周边, 测试时，将培养皿倒过来，使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s，不得有环形或线性的运动。

        8 对于围护结构，每面结构应用不少于4个培养皿按压,，对于设备，每件用不少于2个培养皿按压。

        9 按压取样后的培养皿，应在2h之内，于（35〜37）°C培养箱中培养（24〜48） h后计数。

        10 菌数平均数取到小数点后1位。